实验操作是科研工作的基石，看似重复的移液、称量、记录，实则每一个细节都可能影响结果的可靠性。据统计，约 30% 的实验失败源于操作不规范，而 80% 的科研数据争议可追溯到基础操作的疏漏。今天，我们就来系统梳理实验操作的全流程规范，帮你避开那些 “看不见的坑”。
一、实验前准备：把风险扼杀在萌芽里
1. 方案验证三原则
查文献：确认试剂浓度、反应温度等参数是否有文献支持，优先选择近 5 年的高引论文方法
做预实验：对于新体系，先用 1/10 剂量测试反应稳定性，如 PCR 实验需验证引物特异性
列清单：按 “时间顺序 + 操作逻辑” 罗列步骤，注明 “离心转速≥8000rpm”“孵育温度 ±0.5℃” 等关键条件
2. 试剂与耗材核查
试剂：检查标签上的有效期（如酶类需确认 - 20℃保存时间）、批次号（同一实验用同一批次），易挥发试剂（如甲醛）需核对液面高度
耗材：无菌耗材需确认包装完整性，移液枪头要匹配量程（1000μl 枪禁止用 200μl 枪头），玻璃器皿需提前清洗烘干（避免残留洗涤剂影响 pH 值）
3. 个人防护装备（PPE）选择
基础防护：白大褂（袖口收紧）、一次性手套（接触有机溶剂需用耐化学手套，而非普通乳胶手套）
特殊防护：处理挥发性毒气（如氯仿）需戴防毒面具，操作紫外设备需穿长袖防护服并戴护目镜
二、核心操作规范：细节决定数据可信度
1. 移液操作黄金标准
吸液：枪头浸入液面 1-2mm，缓慢释放按钮（避免产生气泡），生物样本（如血清）需反向吸液（先吸后放）
放液：枪头贴壁，倾斜 45°，按下第一停点后停留 2 秒，粘稠液体（如甘油）需用慢档吹出
校准：每月用天平校准移液枪（取 1000μl 水称重，误差应≤±10mg）
2. 离心操作安全守则
配平：离心管重量差≤0.1g，不对称放置时需用等重空管平衡（如 3 个样本需在对面放 1 个配平管）
启动：盖紧转子盖后，先设转速 500rpm 运行 30 秒，确认无异常再调至目标转速
紧急处理：若出现异响立即按下紧急制动，待完全停稳后开盖（禁止在运行中强行开盖）
3. 恒温设备使用规范
水浴锅：水面需高于样品液面，定期更换蒸馏水（每周 1 次），避免藻类滋生
培养箱：CO₂培养箱需每日记录温度和湿度，开门时间单次不超过 30 秒（防止 pH 波动），支原体污染高发区需每月用 75% 酒精擦拭内壁
三、数据记录与过程追溯：让实验可重复
1. 原始记录五要素
时间：精确到分钟（如 “14:32 加入终止液”）
环境：记录室温、湿度（如电泳实验受湿度影响显著）
现象：详细描述异常情况（如 “溶液出现淡蓝色沉淀，与预期无色不符”）
试剂：记录具体批号（如 “胎牛血清批号 12345，Gibco 公司”）
签名：每次操作后亲笔签名，电子记录需保留修改痕迹
2. 样品管理双编码系统
一级编码：用 “日期 + 样品类型 + 序号”（如 20231025-B-003 代表 10 月 25 日的第 3 个细菌样本）
二级编码：冻存管上同时标注二维码，关联至 LIMS 系统，记录 “冻融次数”“存放位置” 等信息

• 实验后处理：别让收尾工作毁了全程努力

突发情况	处理步骤	预防措施
化学试剂溅到皮肤	立即用流动水冲洗 15 分钟（浓硫酸需先擦再冲），就医	操作时戴护目镜，设置防护挡板
离心机异响	按下紧急制动，待停稳后检查是否配平、转子是否松动	启动前确认转子盖锁死
培养箱污染	清空内部物品，用 10% 次氯酸钠擦拭，紫外线照射 2 小时	定期更换滤膜，避免频繁开门