原代培养及其操作步骤-吉林瑞果科技有限公司【官网】

将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。细胞培养是生物学和医学研究最常用的手段之一，可分为原代培养和传代培养两种。

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1、原代培养的操作步骤为：取材→分离→培养。
（1）取材：对于不同的组织有不同的取材方法，但均应保持材料的新鲜及严格无菌。

皮肤和粘膜：主要取自于手术过程中的皮片，方法似外科取断层皮片手术操作，但面积一般2~4平方厘米。
内脏和实体瘤：内脏除消化道外基本是无菌的，但取材时要明确和熟悉所需组织的类型和部位，实体瘤取材时要取肿瘤细胞丰富的区域，要避开破溃、坏死液化部分，以防污染，尽量去除混杂的结缔组织。
血液细胞：血细胞、淋巴细胞的取材，一般多抽取静脉外周血，或从淋巴组织中（如脾、扁桃体、胸腺、淋巴结等）分离细胞，取材时应注意抗凝。
骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材：严格无菌，注意抗凝，还要尽快分离培养，离心后，用无钙、镁PBS洗两次，再用培养液洗一次后即可培养，不宜低温存放。
鼠胚组织取材：首先用引颈或气管窒息致死法处死孕期合适的动物，然后将其整个浸泡在含有75%酒精的烧杯中，5分钟后（注意时间不能太长，以避免酒精从口或其他通道进入体内，影响组织活力），取出动物，在消毒过的木板上可用无菌的图钉或大头针固定四肢，切开皮肤，用无菌操作法解剖取胚或用无菌止血钳挟起皮肤、用无菌眼科剪沿躯干中部环形剪开皮肤，用止血钳分别挟住两侧皮肤拉向头尾，把动物反包，暴露躯干，然后再固定，更换无菌解剖器材，采用无菌操作法解剖取出胚胎。
幼鼠胚肾（或肺）取材：幼鼠采用上述方法处死消毒后，腹部朝上固定在木板上，先切开游离毛皮并拉开至两侧：然后采用无菌法打开胸腔取肺，或背部朝上固定在木板上，先将背部毛皮切开游离并拉向两侧，然后采用无菌法从背部打开腹腔取肾。
鸡（鸭）鸟类胚胎组织取材步骤：

将胚蛋置于蛋架上，先用温水清洗蛋壳，再用75%酒精棉球擦干；
经碘酒、75%酒精消毒后，在无菌条件下采用无菌法用剪刀或镊子打开气室，沿气室边缘去除蛋壳；
用眼科镊撕去壳膜，暴露出鸡胚；
用弯头镊轻挑起胚头，取出胚胎，放入无菌平皿中，解剖取材。

（2）分离：不同的组织类型采用不同的分离方法。

软组织：软组织分离法包括锐性分离法和钝性分离法。锐性分离法使用锐利的手术器械如刀、剪等切开组织，适用于皮肤、黏膜、浆膜、结缔组织、筋膜、肌肉、腱、血管、神经以及内脏器官的分离。
硬组织：对骨质、软骨角质和蹄壁的分离，则属于硬组织分离法。
食用菌菌种：食用菌菌种的分离方法包括组织分离法、孢子分离法和基内菌丝分离法。组织分离法是在无菌操作条件下，利用子实体内部组织（菌肉、菌柄）、菌核或菌索来分离获得纯菌种的方法。
NK细胞：NK细胞可以从外周血、脐带血、组织（如淋巴组织、脾脏、骨髓等）和诱导多能干细胞(iPSC)中分离。不同的来源有不同的分离方法，例如外周血来源的NK细胞可以通过密度梯度离心法或免疫磁珠分选法分离。

（3）培养：原代细胞的培养方法分为组织块培养法、消化培养法、悬浮细胞培养法和器官培养。前两种是最简单、常用、成功率高的方法。根据不同分离方法取得的细胞接种到培养瓶后，放置于37℃ CO2培养箱中培养。

2、原代细胞培养应用及优缺点

（1）应用领域：

药理学和药效学研究：原代细胞培养可用于评估药物对特定细胞类型的作用和效果，更接近体内情况，有助于筛选和优化药物。
癌症研究：原代肿瘤细胞培养可以提供更准确的癌症模型，用于研究肿瘤的生长、转移和治疗反应。
组织工程研究：原代细胞可用于构建组织工程支架或模拟器官的种子细胞，用于再生医学和器官修复研究。

（2）优点：

保留了原代细胞的体内特性和功能，更能反映生物体内的生理状态。
提供更接近生理环境的模型，用于研究药物的作用机制、毒性和副作用等。
可以从个体中获取，并为个体化医疗和定制治疗提供支持。

（3）缺点：

原代细胞生长有限，容易失去其特性和功能。
培养过程较为复杂，需要特定的培养条件和技术知识。
样本获取受限，且存在批次差异，不同个体之间可能存在差异。

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